一、一抗選擇需要確定或參考的信息

（一）目的蛋白的信息

確定想檢測的目的蛋白是否與抗體識別蛋白信息吻合，注意中英文名字、別名等信息。

某些蛋白具有多種不同的亞型，這需要在選擇抗體之前確定要研究的蛋白亞型。還有些抗體由于其抗原選擇的是不同蛋白亞型共有的肽段區(qū)域，是可以同時識別多個亞型的。有的蛋白通過剪切加工才能轉(zhuǎn)變?yōu)槌墒斓幕钚孕问剑鏑aspase、Insulin等，這就需要根據(jù)研究需要，選擇針對前體或成熟形式的特異性抗體。

（二）抗體制備所用抗原的信息

抗體是由各種不同抗原免疫宿主而制備得來，抗原類型包括：全長蛋白、蛋白片段、多肽、全有機體（如：細(xì)菌）或細(xì)胞，抗體說明書一般都有制備抗體所用抗原的描述。在有些情況下，需要查閱抗體制備相關(guān)抗原信息來選擇抗體。比如，針對重組表達蛋白選擇抗體，如果是表達部分蛋白片段，則需要注意抗體的抗原區(qū)域是否在該片段區(qū)域內(nèi)。某些特殊蛋白（如病原體蛋白）未經(jīng)過內(nèi)部驗證種屬的目的蛋白，需要求助生產(chǎn)商進行蛋白同源性序列比對，并結(jié)合制備抗體所用的抗原序列，查看交叉反應(yīng)的情況。

（三）修飾位點的信息

在選擇合適的抗體用于特定修飾位點研究時，需要特別注意，不同位點的修飾可能有不同的機制存在，不宜一概而論。有關(guān)不同修飾位點的功能，可以通過查閱文獻確定。另外，由于有的蛋白存在不同亞型且序列高度同源，而不同亞型的某些磷酸化修飾位點周圍的序列*相同，因此針對這些保守的修飾位點的抗體往往會同時識別不同亞型的相似修飾位點。

（四）實驗樣本的種屬信息

抗體一般會在出廠前對常見的不同種屬目標(biāo)樣本進行內(nèi)部驗證，以確定可以滿足的不同種屬類型，可以在產(chǎn)品說明書的Species-Reactivity一欄中看到（如人、小鼠、大鼠等）。通過驗證，達到質(zhì)檢要求的種屬會明確標(biāo)記，以備參考。沒有做過關(guān)于這些種屬的實驗，所以不建議使用。一些沒有標(biāo)明的種屬，也有可能是可以應(yīng)用的，建議通過聯(lián)系抗體公司技術(shù)支持來獲得相關(guān)抗原序列比對的信息，根據(jù)蛋白同源性的情況以確定是否可以用于該種屬的樣本。為了避免實驗風(fēng)險，盡量不要使用說明書中沒有提及的標(biāo)本的種屬的抗體。

（五）抗體應(yīng)用的實驗類型

抗體一般會在出廠前對常見的抗體應(yīng)用(WB、IP、ChIP、IHC、IF、FCM)進行內(nèi)部驗證，以確定是否可以滿足不同應(yīng)用要求。通過驗證，達到質(zhì)檢要求的抗體會明確標(biāo)記，以備參考。一些沒有標(biāo)明的應(yīng)用，往往是因為經(jīng)過驗證沒有達到質(zhì)檢標(biāo)準(zhǔn)而不推薦，千萬不要根據(jù)經(jīng)驗或常識去推測某個抗體的應(yīng)用。比如，有的客戶會認(rèn)為，既然某個抗體可以用于IHC，根據(jù)經(jīng)驗推斷應(yīng)該可以用于IF，但畢竟這是不同的兩個應(yīng)用，這樣做可能會浪費很多時間和試劑而不能獲得結(jié)果。抗體廠家不推薦您使用沒有標(biāo)明的應(yīng)用，可以挑選其他的貨號，可能有適用于這個應(yīng)用的更好的其它產(chǎn)品。如果抗體說明書沒有提及的應(yīng)用類型，并不意味著該抗體不適用于此種應(yīng)用類型，而僅是說明尚未經(jīng)過此種應(yīng)用的內(nèi)部驗證。為了避免實驗風(fēng)險，當(dāng)說明書中沒有提及的應(yīng)用方法時，可向生產(chǎn)商申請試用裝，進行初步預(yù)實驗后，再決定是否購買。

（六）標(biāo)記物的信息

有一些實驗，如多重免疫熒光、多指標(biāo)流式測定可能會使用到直接標(biāo)記的一抗（簡稱直標(biāo)一抗）。在進行直標(biāo)一抗選擇時，需要了解到自己將要使用的儀器能檢測到的熒光范圍，針對不同的參數(shù)要求選擇合適的標(biāo)記物。在設(shè)計多重實驗時，應(yīng)考慮每種熒光基團的*性質(zhì)，如大吸收波長和大發(fā)射波長，消光系數(shù)和斯托克斯位移等因素。有關(guān)標(biāo)記物選擇的細(xì)節(jié)，我們將在后面的免疫熒光與流式技術(shù)部分詳加介紹。

二抗選擇需要確定或參考的信息

（一）一抗的來源種屬

主要根據(jù)一抗來源種屬而決定二抗來源，如一抗是小鼠來源，那二抗就買抗小鼠的即可。

（二）二抗應(yīng)用的實驗類型

針對不同的實驗應(yīng)用，需要考慮二抗所偶聯(lián)的標(biāo)記物，如HRP、Biotin、熒光素等標(biāo)記物。WB與IHC所用的二抗，所帶的標(biāo)記物主要選擇HRP和Biotin，而免疫熒光和流式應(yīng)用可根據(jù)實驗設(shè)計的需要，選擇不同熒光素標(biāo)記的二抗，如FITC、Cy3、PE等。