轉基因植物35S基因實時熒光PCR試劑盒【檢驗原理】

 本試劑盒可用于檢測食品或其他材料中是否有轉基因植物35S基因的成分。現代食品加工工藝極大改變了食材原有的味道、氣味、色澤、紋理和質地等特性，因此傳統的感官鑒別技術已經無法對食材的真偽進行準確的鑒定。同時部分食材還有致敏性，因此基于基因檢測的快速靈敏的食材來源檢測技術將對食品監管和安全提供重要的保障。本產品就是為滿足這一需求根據 PCR 原理開發的產品。

1. 即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA。

【使用方法】

1. 樣品處理（樣本處理區）

1.1 樣本前處理

固體樣本：用粉碎機或冷凍研磨儀將樣品研磨至細粉狀。

1.2 DNA提取

對于固體標本，DNA的提取可以采用SN/T 2584-2010中推薦的方法：

• 每個樣品取2個平行管。稱取200mg粉碎的樣品，加入1mL預冷至4℃的抽提液，劇烈搖動混勻后，在冰上靜止5min，4℃條件下10000g離心15min，棄上清液；

• 加入600uL預熱至65℃的裂解液，充分重懸沉淀，在65℃恒溫保持40min，期間顛倒混勻5次；

• 室溫條件下10000g離心10min，取上清液轉移至新離心管中，加入5uLRNAseA，37℃恒溫30min，分別用等體積苯酚：異戊醇溶液和三氯甲烷：異戊醇溶液各抽提一次；

• 室溫條件下，10000g離心10min，取上清液至新離心管，加入三分之二體積的異丙醇，十分之一體積的3mol/L的乙酸鈉溶液（pH=6.5），-20℃放置2-3h；

• 在4℃條件下，10000g離心15min，棄上清液，用70%乙醇洗滌沉淀一次，倒出乙醇，晾干沉淀；

• 加入50uL TE（pH8.0）溶解沉淀，所得溶解即為樣品DNA溶液。

也可使用等效的DNA提取試劑盒。

油脂樣本請直接選用市售油脂DNA提取試劑盒，按說明操作。

?2. 根據轉基因植物35S基因保守區域設計引物，能專一性地檢測出樣品中的轉基因植物35S基因成分

運輸及保存：

低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。使用本試劑盒提供的陽性對照時，由于其濃度較高，一定要注意不要污染其他試劑和成分。在專門的區域操作。

1.1 判斷

檢測通道 Ct 值＜30.0，有 FAM 熒光信號檢出，并出現典型的擴增曲線，判斷樣品為陽性。當30.0≤Ct 值≤35.0 時，且有典型的擴增曲線時，則需重復實驗。再次擴增后檢測體系的Ct 值仍≤35.0，且有典型的擴增曲線。

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