禽流感H5亞型抗體ELISA檢測試劑盒

使用說明書

【產品名稱】

通用名：禽流感H5病毒IgG抗體檢測試劑盒（酶聯免疫法）

英文名：Diagnostic Kit for Antibodies to Avian Influenza H5 Virus (ELISA)

【包裝規格】 96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒

【預期用途】 禽流感又名真性雞瘟或歐洲雞瘟，是由A型禽流感病毒（Avian Influenza Virus，AIV）引起的禽類的一種急性、高度致死性傳染病，以急性敗血性死亡到無癥狀帶毒為特征。

本試劑用于檢測禽類血清中禽流感H5病毒抗體，可用于免疫效果評價、輔助診斷等。

【原    理】

    本試劑盒由預包被禽流感H5病毒抗原的酶標板、抗體工作液、酶標記物及其他配套試劑組成，應用競爭酶聯免疫法原理檢測禽血清或血漿中禽流感H5病毒抗體。實驗時在酶標板中加入稀釋的待檢血清和抗體工作液，若樣品中含有禽流感H5病毒抗體則將阻斷抗體工作液與酶標板上抗原結合，從而使后續反應不出現顯色；反之則出現顯色；顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成負相關；加入終止液終止反應后，產物變為黃色；用酶標儀在450nm波長測定各反應孔中的吸光值，即可知樣品是否含有禽流感病毒抗體。

【試劑盒組成】

【儲存及有效期】 2～8℃保存，有效期12個月。

包被板開封后請于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限為2個月。

【適用儀器】 含450nm、630nm波長的酶標儀，37℃恒溫設備，可調微量移液器。

【樣品準備】

1. 血清/血漿：取動物全血按常規方法制備血清或血漿，要求血清/血漿清亮，無溶血、無污染。樣品1周內可于2～8℃保存，長期需置-20℃保存。

      蛋黃：取2ml新鮮蛋黃加2ml生理鹽水震蕩混勻，3000轉/分鐘離心15分鐘，取上清作為樣本。

1. 待檢血清、血漿或已處理蛋黃樣本恢復室溫、混勻待用。陰、陽性對照不用稀釋。
2. 濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫使沉淀溶解，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋成工作洗滌液(如19份蒸餾水或去離子水+1份濃縮洗滌液)。

【檢驗方法】

1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復至室溫。

2.取所需用量酶標板條，設陰性/陽性對照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。

3.陰、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照50μl；樣品孔每孔先加入40μl工作洗滌液,再加入10μl待檢樣本（稀釋比例為1:5）。

4.每孔加抗體工作液50μl，混勻，蓋好蓋板膜，置37℃（推薦水浴）避光反應30分鐘。

5.甩去孔內液體，每孔加350 ul工作洗滌液，靜置30秒后棄去，重復洗滌5次，后一次拍干。

6.每孔加酶標記物100μl，蓋好蓋板膜，置37℃避光反應30分鐘。

7.洗滌，同步驟5。

8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混勻，蓋好蓋板膜，置37℃避光反應15分鐘。

9.每孔加終止液50μl，混勻，于450nm(可用630nm作參比波長）測定各孔吸光值（A值）。。

【參考值】 實驗正常的情況下，陰性對照吸光值≥1.0，陽性對照吸光值≤陰性對照吸光值×50%。

【檢驗結果的解釋】

1.PI=（1-樣本值/陰性對照孔均值）×100%；

2.未曾免疫雞群：PI≥50為陽性；PI＜50為陰性。

3.免疫雞群：監測并記錄樣本當時的抗體水平，根據結果分析抗體水平的分布及雞群免疫狀態的動向。

【試驗方法的局限性】

    該試驗僅作為定性檢測禽流感H5病毒抗體，根據PI值高低可作抗體水平強、中、弱的粗略評估。

【注意事項】

1.實驗操作時需戴手套、穿工作衣，嚴格健全和執行消毒隔離制度，各種實驗廢棄物都應按傳染物處理。

2.終止液具有腐蝕性，應避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗。

3.酶標板從冷藏環境中取出時應恢復至室溫方可開袋，未用完的酶標板需放入有干燥劑的密封袋中保存。

4.濃縮洗滌液在低溫時容易結晶，使用時需恢復至室溫以*溶解。

5.洗滌時各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。

6.用于檢測的樣品應保持新鮮。

7.試驗結果的判定必須以酶標儀讀數為準。

8.禽流感H5亞型抗體ELISA檢測試劑盒不同批號試劑組分不得混用。